試劑耗材及設(shè)備:磁力分選器,磁柱,CD15磁珠試劑盒,磁珠分選緩沖液50ml,RP1640,1ml 槍及槍頭,20微升槍與槍頭,蜀科低速離心機(jī),15ml離心管4支,細(xì)胞計數(shù)板。
步驟:
1. 制冰,保證磁力分選器可以放入冰盒內(nèi)操作,在4-8℃內(nèi)進(jìn)行分選;
2. 配液磁珠分選緩沖液(50ml PBS液中含2mmol/L EDTA,0.5%BSA,PH=7.2);
3. 將上步初步分選的中性粒細(xì)胞懸液用蜀科低速離心機(jī)300g離心10分鐘,去上清;
4. 細(xì)胞重懸于磁珠分選緩沖液中,107細(xì)胞重懸于80微升緩沖液中;(如細(xì)胞數(shù)多按倍數(shù)增加)
5. 107細(xì)胞中加入20微升CD15磁珠;充分混勻放入2-8℃避光孵育15分鐘;
6. 用1-2ml緩沖液洗滌細(xì)胞/107細(xì)胞,再次用蜀科低速離心機(jī)300g離心10分鐘,去上清;
7. 重懸細(xì)胞于緩沖液中,108細(xì)胞重懸于500微升緩沖液中;
8. 將磁力分選器置于冰盒中,用3ml緩沖液沖洗磁柱;
9. 將含有中性粒細(xì)胞的緩沖液加入磁柱中;
10. 用緩沖液沖洗磁柱,每次3ml,沖洗3次;
11. 除去磁場,把磁柱放置于15ml離心管上,用5ml緩沖液加壓快速沖洗磁柱;
12. 離心管中收集的便是中性粒細(xì)胞;
13. 后用蜀科低速離心機(jī)300g離心去上清,重懸細(xì)胞于10ml細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞計數(shù)。
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